罗布罗布芽生菌探针法荧光定量PCR试剂盒
产品名称：罗布罗布芽生菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Loboa lobai
产品货号：LZ-P3735
分类：PCR检测试剂盒
罗布罗布芽生菌PCR储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
PCR检测试剂盒有效期一般为1年，这是指在适当的储存温度下。核酸扩增部分的试剂一般要贮存于-20℃下，产物检测部分试剂则贮存于2-8℃。尽量避免反复冻融。上海
【结果分析条件设定】
u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的高点。
【质控标准】
1. 罗布罗布芽生菌试剂阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；
3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。
【结果判断】
1.阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；
3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4)对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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罗布罗布芽生菌探针法荧光定量PCR试剂盒Phospho-Stathmin(Ser25)： 0酸化原癌基因蛋白18 0.1ml
EPS8： 表皮生长因子受体底物8抗体 0.1ml
滑膜细胞凋亡抑制物1抗体 Anti-SYVN1 hu、 rat、 mo、 cattle 0.2ml
Anti-TIMP-2/FITC 荧光素标记金属蛋白酶组织抑制因子-2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
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Bak(BCL2 homologous antagonist/killer) Bcl-2同源拮抗剂Bak(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.2mg
PCR检测步骤:
1、样品处理
1）按照GB 4789.10-2016（或SN/T 1870-2016），取样品25g（mL），加入到含有225mL 7.5% NaCl肉汤的无菌容器中均质，调节pH至6.8±0.2。
2）36±1℃培养18-24h。
注：也可参考其他地方标准进行样品的前处理。
2、核酸提取
1）取40μL增菌液于裂解液管中，98℃或沸水浴10min。
2）冷却至室温，吸取上清备用或者置于-20℃保存。
3、反应体系配置
从试剂盒中取出SA预混液，充分融化，短暂离心，然后将阴性对照、样品的DNA提取液、阳性对照各取5μL分别加入PCR管中，盖好管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
4、PCR扩增
PCR管置于PCR仪上，推荐反应程序设定如下：反应体系为25μL，在第二步每个循环60℃时检测荧光信号，检测通道选择FAM。
