IgG抗狂犬病毒ELISA试剂盒
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实验目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中IgG抗狂犬病毒的含量。
实验原理:
上海试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联吸附试验(ELISA)。往预先包被IgG抗狂犬病毒的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中IgG抗狂犬病毒呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度
试剂盒组成:
操作步骤:
Virus ELISA方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
抗狂犬病毒试剂盒方法二 用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
注意事项:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在酶联ELISA试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:用直接ELISA检测试剂盒法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
公司正在出售的产品:
FUCA1 Protein Human 重组人 FUCA1 蛋白 (His 标签)
血清抗体
兔子补体片断3a(C3a)ELISA检测试剂盒RabbitComplemefragme3a,C3aELISAKit 96T/48T
甘露糖受体C2(MRC2)重组蛋白 Recombinant Mannose Receptor C Type 2 (MRC2)
CD97 Protein Human 重组人 CD97 蛋白 (Fc 标签)
信号素3C(SEMA3C)重组蛋白 Recombinant Semaphorin 3C (SEMA3C)
DNASE1 Protein Human 重组人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 蛋白 (His 标签)
HumanAi-Saccharomycescerevisiaeaibody,ASCAELISAKit人抗酿酒酵母抗体(ASCA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
小鼠碱性1酸酶(ALP)试剂盒 Mouse alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit
BAX(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
血小板内皮细胞黏附分子-1抗体
Sema3A (semaphorin 3A 0.5mgSema3A (semaphorin 3A) 臂板蛋白3A(多肽)
BCL2L1 Protein Human 重组人 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (His 标签)
调亡诱导因子抗体
转钴胺素蛋白2抗体
嗅素4(OLFM4)重组蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)
犬内皮生长因子受体(EGFR)试剂盒 Canine Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR ELISA Kit
人胃肠癌标志物CA199ELISA 试剂盒 96T/48T
液泡分选蛋白4抗体 Anti-VPS4a WB IHC-P IHC-F IF 100ul
腹肌 进口/国产
抑瘤素M抗体
Rat dopamine (DA) ELISA Kit 大鼠多巴胺(DA)ELISA试剂盒
HumanCollageypeⅢ,ColⅢELISAKit人Ⅲ型胶原(ColⅢ)ELISA试剂盒规格:96T/48T
IgG抗狂犬病毒ELISA试剂盒碱性成纤维细胞生长因子9抗体