人基质金属蛋白酶基因PCR检测试剂盒

来源：上海联祖生物科技有限公司 时间：2024-05-11 13:24:21 [举报]

产品介绍：

产品名称：人基质金属蛋白酶基因PCR检测试剂盒

产品货号：LZ-P1763

分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

有效期：一年

实验步骤：

一．样品制备

1．PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测，上样量3-5ul。PCR产物为10ng/nl左右为佳。

2．PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ul SSCP上样缓冲液（变性缓冲液，同《分子克隆》中的测序缓冲液），然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验，扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul，效果很好加0.5ul，如果不太好就适当增加1.5、2或3不等，同时加大上样缓冲液的量，比如加3ul的PCR产物，缓冲液加到8ul变性效果更好。

3．PCR产物变性。加好的样品进行离心，使样品集中在管底。PCR仪上95℃变性10分钟，立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min，以免变性的产物复性。

如何进行 PCR 实验？

一、人基质金属蛋白酶准备实验材料（1）DNA模板：包含你想要复制的DNA区域。上海（2）引物：短的单链DNA片段，用于指导DNA合成的起始位置。（3）DNA聚合酶：一种酶，用于合成DNA。（4）四种脱氧核苷酸（dNTPs）：DNA的构建块。（5）缓冲液：提供适宜的反应环境。（6）镁离子或其它必需的离子：通常作为DNA聚合酶的辅助因子。二、设定反应混合物将所有材料混合在微量离心管中。混合物的总体积通常在20-50微升之间。

1. 3. PCR程序（1）将混合物放入PCR机（热循环仪）中，并设定程序。PCR程序通常包括以下阶段：（2）初次变性：加热至94-98°C，持续几分钟，使DNA双链解开成单链。（3）循环步骤（通常进行30-40次循环）：（4）变性阶段：加热至94-98°C，持续20-30秒，使DNA双链解开。（5）退火阶段：降温至50-65°C，持续20-40秒，允许引物与模板DNA结合。（6）延伸阶段：加热至72°C，持续1分钟每1千个碱基，以便DNA聚合酶合成新的DNA链。（7）后延伸：在72°C下持续5-10分钟，确保所有可用的DNA模板都被复制。（8）保持阶段：将温度降至4-15°C，直到用户准备取出样品。

PCR实验的基本步骤：

DNA聚合酶是实验室中常用的生物学酶之一，在PCR实验中具有重要的作用。实验室常用的DNA聚合酶，包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。

一、PCR检测试剂盒Taq聚合酶：

Taq聚合酶是由Thermus aquaticus细菌产生的一种DNA聚合酶，在分子生物学研究中得到广泛应用。Taq聚合酶具有热稳定性，可以在高温条件下保持活性，这是由于其来源于热液生物，能够存活和正常活动于高温环境。这使得Taq聚合酶在聚合酶链式反应（PCR）中起到关键的作用。Taq聚合酶能够按照DNA模板合成新的DNA链，因此在PCR中用于扩增目标DNA片段。然而，Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性，导致其生成的PCR产物末端容易出现额外的腺嘌呤碱基。因此，在某些应用中，需要使用具有外切酶活性的聚合酶。

二、Pfu聚合酶：

Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶相比，Pfu聚合酶具有更高的热稳定性和耐酶性。这使得Pfu聚合酶在高温PCR反应中表现出色，其高度稳定的酶活性能够确保PCR反应的可靠性和准确性。此外，Pfu聚合酶还具有3'-5'外切酶活性，可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配，有效防止误差累积。因此，Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。

三、Tth聚合酶：

Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同，Tth聚合酶具有热活性反转转录酶活性，可以将RNA模板合成相应的DNA链。因此，Tth聚合酶在逆转录PCR（RT-PCR）中得到广泛应用，用于将RNA转录成DNA，并通过增加热活性酶来实现PCR扩增。此外，Tth聚合酶还具有一定的外切酶活性，可用于修复和校正PCR产物的末端。

10—羟基癸烯酸 10-xy7noxydecenoic acid 50mg

蟛蜞菊内酯Wedelolactone1924-1-920mg

Bulleyanin BULLEYANIN 123043-54-9

环氧泽泻烯87701-68-6Alismoxide

D-松醇;D-Pinitol 10284-63-6 20mg 订购|咨询

大叶仙茅Curculigo capitulata Orcinol 3,5-二羟基, 5-甲基间本二酚 504-15-4 C7H8O2 ≥95%

维生速A醋醋酯Vitcmincccqtctq20mg/支

雷公藤ipterygium wilfordii Hook. f. ipdiolide 雷公藤乙素 38647-10-8 C20H24O7 标准黏度液1 0055

中药对照药材头花蓼121282-200402TLC法鉴别

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306-21-8 轻臭羟本丙胺标准品 200mg

猪胰岛速(高〕Porcineinsulin(highpurity.约20mg

Norglaucine xy7nochloride 39945-41-0

Mesalamine 美沙拉嗪标准品89-57-6 200mg美沙拉嗪标准品

4-甲氧基 673-22-3 HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

人基质金属蛋白酶基因PCR检测试剂盒小鼠Sesin小鼠2蛋白(SESN2)ELISA试剂盒 ，英文名： SESN2 ELISA Kit

人抗凝血酶受体(A)ELISA检测试剂盒Humanai-thrombieceptor,AELISAKit 96T/48T

大鼠红细胞生成素受体(EPOR)试剂盒 Rat Erythropoietin receptor,EPOR ELISA Kit

英文名称RatSerotonin5-HydroxyyptamineELISAKit大鼠5-羟色(5-HT)规格：96T/48T

裂解液ⅩI非变性细胞蛋白制备

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