来源:上海联祖生物科技有限公司 时间:2024-04-30 13:24:17 [举报]
产品介绍:
产品名称:山羊CYTB基因检测试剂盒
产品货号:LZ-P2141
规格:50T
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光。
有效期:一年
如何进行 PCR 实验?
一、准备实验材料(1)DNA模板:包含你想要复制的DNA区域。上海(2)引物:短的单链DNA片段,用于指导DNA合成的起始位置。(3)DNA聚合酶:一种酶,用于合成DNA。(4)四种脱氧核苷酸(dNTPs):DNA的构建块。(5)缓冲液:提供适宜的反应环境。(6)镁离子或其它必需的离子:通常作为DNA聚合酶的辅助因子。二、设定反应混合物将所有材料混合在微量离心管中。混合物的总体积通常在20-50微升之间。
3. PCR程序(1)将混合物放入PCR机(热循环仪)中,并设定程序。PCR程序通常包括以下阶段:(2)初次变性:加热至94-98°C,持续几分钟,使DNA双链解开成单链。(3)循环步骤(通常进行30-40次循环):(4)变性阶段:加热至94-98°C,持续20-30秒,使DNA双链解开。(5)退火阶段:降温至50-65°C,持续20-40秒,允许引物与模板DNA结合。(6)延伸阶段:加热至72°C,持续1分钟每1千个碱基,以便DNA聚合酶合成新的DNA链。(7)后延伸:在72°C下持续5-10分钟,确保所有可用的DNA模板都被复制。(8)保持阶段:将温度降至4-15°C,直到用户准备取出样品。
实验步骤:
一.样品制备
1.PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为10ng/nl左右为佳。
2.PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ul SSCP上样缓冲液(变性缓冲液,同《分子克隆》中的测序缓冲液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就适当增加1.5、2或3不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加3ul的PCR产物,缓冲液加到8ul变性效果更好。
3.PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95℃变性10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min,以免变性的产物复性。
PCR实验的基本步骤:
DNA聚合酶是实验室中常用的生物学酶之一,在PCR实验中具有重要的作用。实验室常用的DNA聚合酶,包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。
一Taq聚合酶:
CYTB检测试剂盒Taq聚合酶是由Thermus aquaticus细菌产生的一种DNA聚合酶,在分子生物学研究中得到广泛应用。Taq聚合酶具有热稳定性,可以在高温条件下保持活性,这是由于其来源于热液生物,能够存活和正常活动于高温环境。这使得Taq聚合酶在聚合酶链式反应(PCR)中起到关键的作用。Taq聚合酶能够按照DNA模板合成新的DNA链,因此在PCR中用于扩增目标DNA片段。然而,Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性,导致其生成的PCR产物末端容易出现额外的腺嘌呤碱基。因此,在某些应用中,需要使用具有外切酶活性的聚合酶。
二、CYTB试剂盒Pfu聚合酶:
Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶相比,Pfu聚合酶具有更高的热稳定性和耐酶性。这使得Pfu聚合酶在高温PCR反应中表现出色,其高度稳定的酶活性能够确保PCR反应的可靠性和准确性。此外,Pfu聚合酶还具有3'-5'外切酶活性,可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配,有效防止误差累积。因此,Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。
三、Tth聚合酶:
Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同,Tth聚合酶具有热活性反转转录酶活性,可以将RNA模板合成相应的DNA链。因此,Tth聚合酶在逆转录PCR(RT-PCR)中得到广泛应用,用于将RNA转录成DNA,并通过增加热活性酶来实现PCR扩增。此外,Tth聚合酶还具有一定的外切酶活性,可用于修复和校正PCR产物的末端。
107257-20-5 酮洛芬相关物质A标准品 25mg
地果Ficus tikoua Alpha-软脂酸香树精酯 22255-10-3 C46H80O2 ≥95% 噻奈普汀 - 对照谱图(Y0000151
七扶菊酯标准品 草同标准品 特草定标准品
Azathioprine硫唑嘌呤标准品446-86-6200mg硫唑嘌呤标准品
L-赖酸盐酸盐 6 HPLC≥98%;200mg 订购|咨询
臭椿Ailanthus altissima Ocotillone (24S)-20,24-环氧-25-羟基达玛树脂-3-酮 22549-21-9 C30H50O3 ≥97%
甘露醇McnnitolHPLC≥99%,100mg/支
茶叶 Camellia sinensis(L.)O.Kuntze Theophylline 茶减 58-55-9 C7H8N4O2 单元素碲溶液成分分析标准物质080595
HPLC法含量测定维生素B2100369-200502常温,避光100mg
Bitarate Dihydrate 二水合重泥古丁标准品6019-6-3500mg
千里光Senecio scandens Noreugenin 去甲丁香色原酮 1013-69-0 C10H8O4 ≥98%
紫草醋Purplqoxclicccid8831-62-420mg
分叶小檗Berberis pruinosa Tachioside 它乔糖甙 109194-60-7 C13H18O8 本(1004
中药对照药材山香圆叶121230-0301TLC法鉴别
Taraxeryl acetate乙酰蒲公英萜醇度:≥90%
山羊CYTB基因检测试剂盒小鼠V-Ha-Ras肉瘤病毒癌基因同源物(HRAS)ELISA试剂盒 ,英文名: HRAS ELISA Kit
大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA检测试剂盒Ratplatelet-derivedgrowthfactor,PDGFELISAKit 96T/48T
人HSP60 IgG抗体试剂盒 Human Hsp60 IgG aibody ELISA kit
英文名称MousebFGFELISAKit小鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)规格:96T/48T
冰冻切片半胱酸蛋白酶-7(CASPASಉ㒠ಉ
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