伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

产品介绍：

产品名称：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Actinobacillus actinomycetemcomitans

产品货号：LZ-P3182

规格：50T

分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

有效期：一年

实验步骤：

一．样品制备

1．PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测，上样量3-5ul。PCR产物为10ng/nl左右为佳。上海

2．PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ul SSCP上样缓冲液（变性缓冲液，同《分子克隆》中的测序缓冲液），然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验，扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul，效果很好加0.5ul，如果不太好就适当增加1.5、2或3不等，同时加大上样缓冲液的量，比如加3ul的PCR产物，缓冲液加到8ul变性效果更好。

3．PCR产物变性。加好的样品进行离心，使样品集中在管底。PCR仪上95℃变性10分钟，立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min，以免变性的产物复性。

如何进行 PCR 实验？

一、伴放线放线杆菌准备实验材料（1）DNA模板：包含你想要复制的DNA区域。（2）引物：短的单链DNA片段，用于指导DNA合成的起始位置。（3）DNA聚合酶：一种酶，用于合成DNA。（4）四种脱氧核苷酸（dNTPs）：DNA的构建块。（5）缓冲液：提供适宜的反应环境。（6）镁离子或其它必需的离子：通常作为DNA聚合酶的辅助因子。 二、设定反应混合物将所有材料混合在微量离心管中。混合物的总体积通常在20-50微升之间。

1. 3. 探针法荧光定量PCRPCR程序（1）将混合物放入PCR机（热循环仪）中，并设定程序。PCR程序通常包括以下阶段：（2）初次变性：加热至94-98°C，持续几分钟，使DNA双链解开成单链。（3）循环步骤（通常进行30-40次循环）：（4）变性阶段：加热至94-98°C，持续20-30秒，使DNA双链解开。（5）退火阶段：降温至50-65°C，持续20-40秒，允许引物与模板DNA结合。（6）延伸阶段：加热至72°C，持续1分钟每1千个碱基，以便DNA聚合酶合成新的DNA链。（7）后延伸：在72°C下持续5-10分钟，确保所有可用的DNA模板都被复制。（8）保持阶段：将温度降至4-15°C，直到用户准备取出样品。

人巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2/CXCL-2)ELISA

小鼠含样环和上皮生长因子样域酪酸激酶2(Tie-2)试剂盒 Mouse tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 ELISA kit

受体α(INSRA)PCR检测试剂盒 ， INSRA ELISA Kit

Mouseapoptosisinducingfactor,AIFPCR检测试剂盒小鼠凋亡诱导因子(AIF)PCR检测试剂盒

ELISAKitCD30小鼠白细胞分化抗原30规格：48T/96T

GoatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKit山羊坏死因子α(TNF-α)PCR检测试剂盒

MCP-1/CCL2/MCAF ELISA KIT 大鼠单核细胞趋化蛋白1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-ADK/adenylate kinase/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠腺苷酸激酶抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FBXL20 FBXL20蛋白抗体 规格 0.2ml

LTE4 ELISA Kit 大鼠白三烯E4 96T

Phospho-MARCKS(Ser170) 英文名称： 0酸化蛋白激酶C底物Marcks抗体 0.1ml

ARTS 英文名称： 凋亡相关蛋白TGFb信号抗体 0.2ml

Anti-ADK/adenylate kinase/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠腺苷酸激酶抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒Anti-NRP-2/FITC 荧光素标记神经纤毛蛋白-2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-CD184/CXC-R4/PE 荧光素PE标记细胞表面趋化因子受体4抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

血小板内皮细胞黏附分子-1抗体 Anti-CD31 0.1ml

Goat Anti-Mouse IgG/APC APC标记的羊抗小鼠IgG 0.1ml

phospho-FRS2(Tyr436) 英文名称： 0酸化成纤维细胞生长因子受体底物2抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh Plexin B2 神经丛蛋白B2抗体 规格 0.2ml

Anti-CD184/CXC-R4/PE 荧光素PE标记细胞表面趋化因子受体4抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

PCR实验的基本步骤：

DNA聚合酶是实验室中常用的生物学酶之一，在PCR实验中具有重要的作用。实验室常用的DNA聚合酶，包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。

一、Taq聚合酶：

Taq聚合酶是由Thermus aquaticus细菌产生的一种DNA聚合酶，在分子生物学研究中得到广泛应用。Taq聚合酶具有热稳定性，可以在高温条件下保持活性，这是由于其来源于热液生物，能够存活和正常活动于高温环境。这使得Taq聚合酶在聚合酶链式反应（PCR）中起到关键的作用。Taq聚合酶能够按照DNA模板合成新的DNA链，因此在PCR中用于扩增目标DNA片段。然而，Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性，导致其生成的PCR产物末端容易出现额外的腺嘌呤碱基。因此，在某些应用中，需要使用具有外切酶活性的聚合酶。

二、Pfu聚合酶：

PCR法Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶相比，Pfu聚合酶具有更高的热稳定性和耐酶性。这使得Pfu聚合酶在高温PCR反应中表现出色，其高度稳定的酶活性能够确保PCR反应的可靠性和准确性。此外，Pfu聚合酶还具有3'-5'外切酶活性，可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配，有效防止误差累积。因此，Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。

三、Tth聚合酶：

Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同，Tth聚合酶具有热活性反转转录酶活性，可以将RNA模板合成相应的DNA链。因此，Tth聚合酶在逆转录PCR（RT-PCR）中得到广泛应用，用于将RNA转录成DNA，并通过增加热活性酶来实现PCR扩增。此外，Tth聚合酶还具有一定的外切酶活性，可用于修复和校正PCR产物的末端。